■10 x Cell / tissue lysis buffer
Tris Hcl-----30.3g
NaCl-----43.83ｇ
EDTA2Na-----1.86g
H2O-----400ml
↓
pH7.4に合わせる
↓
500mlにメスアップ
↓オートクレーブ
室温保存
■1% NP40 cell / tissue lysis buffer 100ml
10% NP40 (in DW) 10ml
10 x cell / tissue lysis buffer 10ml
DW 80ml
↓
室温保存
使用時はプロテアーゼインヒビターやフォスファターゼインヒビターを加える
■LB medium 1L
Bacto Tryptone 10g
Bacto Eeast Extract 5g
NaCl 10g
DW up to 1L
↓オートクレーブ
4℃保存
使用時は以下のアンピシリンまたはカナマイシン溶液を1/100量加える
■カナマイシン溶液 50mg/ml
カナマイシン塩酸塩 500mg
DW up to 10ml
↓フィルター滅菌 (省略可)
-20℃保存
■アンピシリン溶液 50mg/ml
アンピシリン500mg
DW up to 10ml
↓フィルター滅菌 (省略可)
-20℃保存
■2x 組換えアデノウイルス保存 buffer
組成：10mM Tris pH8.0, 100mM NaCl, 0.1% BSA, 50%Glycerol
Tris 121mg
NaCl 584mg
BSA 100mg
DWを40ml加える
↓
pHを8.0に合わせる
↓
DWで50mlにメスアップ
↓
グリセロールで100mlにメスアップ
↓
0.45umのフィルターに通す
↓
4℃保存
ウエスタンブロッティング用Buffer ①～⑪
①10×TG buffer (トランスファーで使用)
Tris 36.25g
グリシン 181.2g
DW up to 1L
↓
スターラーをまわして溶かす
↓
室温保存
②10× TBS buffer
Tris 60.6g
NaCl 87.6ｇ
DW 800ml
↓
スターラーでとかしてpHを7.6にする. 6mol/Lの塩酸50ml以上必要
↓
DWで１Lにする
↓
室温保存
③1×TBS-T 0.1% (洗浄用、ブロッキング用、抗体希釈用)
TBSを1×にして、Twwen20を0.1％分加える
↓
4℃保存
④10×runing(泳動)バッファー
Tris 30.3g
グリシン 144g
SDS 10g
DW up to 1L
↓
室温保存
⑤トランスファーバッファー
20％ or 10%メタノール in 1×TG
用事調整 作り置きは避ける
⑥5% Skim milk in 1×TBS-T (ブロッキング、抗体希釈用)
Skim milk 2g
1×TBS-T up to 40ml
↓
4℃保存
1週間以内に使用する
⑦10% 過硫酸アンモニウム（APS）
過硫酸アンモニウム 1g
DW up to 10ml
↓
-20℃保存
⑧20 % SDS
SDS 20g
DW up to 100ml
↓
室温保存
⑨ 2x SDS Protein Sample Buffer
グリセロール 2ml
1M Tris/HCl pH 6.8 1.2ｍl
SDS 0.4g
Bromophenol blue 2mg
DW up to 10ml
↓
室温保存
使用時にβ-メルカプトエタノール を10%ととなるように調整
⑩1M Tris HCl (pH6.8)
Tris 60.55g
H2O350ml
↓
1mol/L塩酸でpH 6.8に合わせる
↓
500mlにメスアップ
↓オーククレーブ
室温保存
⑪1.5 M Tris HCl (pH8.8)
Tris 90.83g
H2O 350,l
↓
1mol/L塩酸でpH 8.8に合わせる
↓
500mlにメスアップ
↓オーククレーブ
室温保存
■SNET buffer 1L
Tris 1.12g
EDTA 2Na 29.2g
SDS 5g
DW 800ml
↓
pH 8.0に合わせる
↓
DW up to 1L
↓
室温保存
■Proteinase sol (10mg (483u)/ml)
Proteinase K 100mg (Nakarai 29442-14)を10 mlのミリQ水で溶かす
→小分けにして-20℃保存
■High salt buffer for RNA extraction
1.2M Nacl /0.8M くえん酸三ナトリウム二水和物
Nacl 14.03g
くえん酸三ナトリウム二水和物 47.06g
DW up to 200ml
↓
オートクレーブ
↓
室温保存
■10x PBS
Nacl 160g
KCl 4g
リン酸 水素 ２ナトリウム 58g
リン酸 2水素 カリウム 4g
DW up to 2L
↓
オートクレーブ
↓
室温保存
■ミトコンドリア単離Buffer 以下①～④
① 2M Tris HCl 200ml
Tris 24.23g
DWup to 160ml
Adjust pH7.5 using HCl
DW up to 200ml
↓
室温保存
② 0.25M EDTA 200ml
EDTA 2Na 2H2O18.61g
固形化NaOH 2g程度
DW160ml
Adjust pH 7.4 using NaOH
DW up to 200ml
↓
室温保存
③ 0.1M DDT 10ml
DDT 15402mg
DW up to 10ml
↓
小分けにして-20℃保存
④ミトコンドリア単離実験直前に以下のように調整、当日使い切り
ショ糖 855.8mg (Final 250mM)
①25ul
②40ul
③100ul
プロテアーゼインヒビターカクテル
DW up to 10ml
■2次元電機泳動・その他用 Urea lysis buffer
For 200ml scale
Stook solution①
Urea (6M) 72.72g
Thiourea (2M) 30.48g
CHAPS (2%) 4g
TritonX100 (1%) 2ml
DW up to 195ml
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Store at room temp as stook solution①
Stook solution②
DDT 2g
DW up tp 10ml
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Store at -20℃ as stook solution②
③Adjust just before use
Stook solution① 9.5ml
Stook solution② 0.5ml
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Total 10ml